| 灵芝对白介素-2（IL-2）产生的影响 |
| 【 整理发布：王力野生灵芝网 】 【 发布日期：7/6/2011 】 浏览次数:1542 |
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本文主要研究日本产灵芝对小鼠脾细胞产生IL-2的影响。结果表明在试管内氢化考的松（HC）和环胞霉素（CsA）可抑制脾细胞产生IL-2，灵芝10～100μg/ml可对抗其抑制作用，使IL-2产生增加。整体研究表明灵芝300mg/kg po.促进脾细胞产生IL-2，即使在有氢化考的松或环胞霉素A存在条件下，灵芝的作用依然明显。
关键词 灵芝；白介素-2（IL-2）
白介素-2（IL-2）是最重要的淋巴因子之一，具有多种生物学功能，不仅可以在试管内使T细胞持续生存，而且在免疫调节网络中也占重要地位。IL-2主要由T辅助细胞产生，所以IL-2的水平亦间接地反映了T细胞的功能[1]。已知灵芝可以作用于免疫系统影响多种免疫功能，本文旨在研究灵芝对脾细胞产生IL-2的作用，进而分析其对免疫系统的影响。
材料与方法
动物
C57BL/6小鼠，8～12周龄；昆明种小鼠，16～20g。均由上海医科大学实验动物部供应。
试剂
灵芝热水提取物由日本和汉生药研究所提供，按前述方法制备。
RPMI-1640培养基为GIBCO产品，含青霉素100μ/ml,链霉素100μg/ml,Hepes 15mmol及10%小牛血清（NCS）。刀豆蛋白（Con A）,Sigma产品。2-甲基-D-甘露糖苷（2-MM），上海试剂二厂产品。环胞霉素为瑞士三道士药厂产品。静脉注射用制剂每毫升含Cyclosporin A 50mg, Polyoxyethylated Castcr Oil 650mg及33%乙醇。
3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR），中国科学院原子核研究所生产，比活性为1110GBq/mmol。
在试管内诱导IL-2产生
小鼠脾细胞，调节细胞浓度为５×106/ml，加入24孔培养板，与不同浓度灵芝及3μg/ml的Con A混合，37℃ 5% CO2中培养24h，取上清，离心，贮于-30℃，待测。
灵芝预处理脾细胞的作用
为消除在测定IL-2活性的培养上清中所含药物的影响，部分实验作以下设计：脾细胞与灵芝或其他药物共同培养10h，离心，弃上清液，细胞洗2次，重新加入Con A 3μg/ml，培养24h，收集各组上清液，离心，贮于-30℃，待测。
灵芝在整体对IL-2产生的影响
小鼠随机分组。对照组口服0.2%CMCqd.×6。灵芝组分别口服灵芝150及300mg/kg,qd.×6,部分组灵芝合并应用氢化考的松（HCip.qd.×6）或环磷酰胺（CYA）ip.qd.×3(d4～d6)。第7天小鼠处死取脾脏，调节脾细胞数如前，加ConA 3μg/ml,培养24h。取上清，贮于-30℃，待测。
IL-1活力测定
利用活化的脾细胞测定IL-2[2]。C57BL/b小鼠颈椎脱位处死，取脾，脾细胞经溶红细胞后洗3次，调节细胞浓度至2×106/ml，加入Con A 3μg/ml,37℃ 5% CO2中培养48h，收集此活化的脾细胞，以含20mg/2ml α-mm的RPML-1640洗2次以消除残存Con A。台盼蓝染色计数，调节细胞浓度至2×106/ml。将细胞滤液加入96孔板，每孔100μl。同时放入经对倍稀释的待测上清100μl，37℃ 5% CO2中培养24h。培养结束前6h每孔加入3H-TdR 9.25kBq。以多头细胞收集仪将细胞收集至醋酸纤维薄膜。测定结合的3H-TdR量。
结 果
氢化考的松的抑制作用
氢化考的松可以在试管内抑制脾细胞产生IL-2，经用不同稀释度的上清测定，证明在适当稀释度可以显示其抑制效应。
灵芝在试管内对氢化考的松抑制作用的影响
表7-1，7-2表明HC 0.025～1μg/ml在试管内明显抑制脾细胞产生IL-2。灵芝可以对抗HC的抑制作用而恢复IL-2的产生。但灵芝本身在试管内对脾细胞产生IL-2并无明显影响。
表7-1 灵芝合并应用氢化考的松在试管内对小鼠脾细胞产生IL-2的影响
灵芝 Con A HC cpm/1×106细胞
μg/ml μg/ml μg/ml
对照 3 -- 2025±167
-- 3 0.025 1530±149
1 3 0.025 1409±183
10 3 0.025 2005±210
100 3 0.025 2205±335
表7-2 灵芝与氢化考的松在试管内对小鼠脾细胞产生IL-2的影响
灵芝 Con A HC cpm/1×106细胞
μg/ml g/ml μg/ml
对照 3 -- 8389±658
-- 3 1 3944±262
1 3 1 4348±482
10 3 1 5396±260**
100 3 1 5450±426**
上清液稀释度1∶16； X±SD； n=4; 与对照组比△△P<0.01,与HC组比 **P<0.01
灵芝与环胞霉素在试管内对IL-2产生的影响
表7-3表明CsA 0.05μg/ml明显抑制脾细胞产生IL-2，灵芝可对抗CsA的抑制作用，增加脾细胞分泌IL-2。
表7-3 灵芝与环胞霉素在试管内对小鼠脾细胞产生IL-2的影响
灵芝 Con A HC cpm/1×106细胞
μg/ml μg/ml μg/ml
对照 3 -- 8389±658
-- 3 0.05 5667±450
1 3 0.05 5763±395
10 3 0.05 6495±446**
100 3 0.05 6539±557**
上清液稀释度1∶16； X±SD； n=4; 与对照组比△△P<0.01,与CsA组比 **P<0.05
灵芝对氢化考的松、环胞霉素预处理脾细胞的作用
为消除在被测上清中所含药物对IL-2的测定可能产生的影响，将灵芝单独，或合并HC或CsA与脾细胞共同培养10h，弃去培养液，细胞洗2次，加入含3μg/ml Con A的新鲜培养基继续培养24h测定上清IL-2的活力。结果如，表7-4所示，灵芝10～100μg/ml的预处理对脾细胞无明显影响。HC及CsA 0.05μg/ml预处理后使脾细胞产生IL-2减少，但灵芝可以恢复被HC或CsA抑制的作用而使脾细胞分泌IL-2增加。
表7-4 灵芝与氢化考的松预培养脾细胞10h对IL-2产生的影响
灵芝 Con A HC cpm/1×106细胞
μg/ml μg/ml μg/ml
对照 3 -- 34724±1702
10 3 -- 35157±949
100 3 -- 35178±1076
-- 3 0.05 24438±2004△△
1 3 0.05 21811±1639**
10 3 0.05 31751±1064**
100 3 0.05 33744±2850**
上清液稀释度1∶16； X±SD； n=4; 与对照组比△△P<0.01,与HC组比 ***P<0.01
灵芝在整体对IL-2产生的影响
亦表明当灵芝与HC 15mg/kg腹腔注射qd.×6及灵芝与CYA 40mg/kg腹腔注射qd.×3(d4～d6)合并应用时，联合灵芝组的小鼠脾细胞产生的IL-2较单用免疫抑制剂者为高。虽然在当时条件下HC与CYA单独使用并未明显抑制IL-2产生。这可能与TS和TH所受作用处于平衡状态有关，但一旦加入灵芝，后者增强TH和产生IL-2的作用。即明显显示。
讨 论
1976年Morgen报道在致分裂原刺激的淋巴细胞培养上清中存在一种因子，能维持激活后的T细胞在体外长期生长，该因子被称为T细胞生长因子（TCGF），于1979年国际淋巴因子专题会议上被统一命名为IL-2[3]。鉴于IL-2在免疫调节中的重要地位，包括上调多种功能，提高NK细胞的活力，激活T杀伤细胞，介导B细胞与巨噬细胞的活化，因此出现了新的假设以说明T细胞的活化过程[4]，进而导致治疗肿瘤新思维、新措施的产生。由此考虑免疫调节剂间接过影响IL-2的产生而发挥作用是很自然的。
作者已报道灵芝能作用于免疫系统影响多种功能。本文的目的主要是观察灵芝对小鼠脾细胞产生IL-2的影响。研究表明灵芝无论在试管内及整体均可刺激脾细胞产生IL-2，它能对抗免疫抑制剂HC，CsA及CYA的作用，恢复受抑制的淋巴细胞产生IL-2的能力。临床报道T细胞功能受抑的病人如晚期肿瘤，老年人，原发性或获得性免疫缺陷病人的淋巴细胞产生IL-2的能力低下，给这种病人以促进IL-2生成的药物，理应是有益的。灵芝的上述作用能否有助于说明其临床应用的效果，值得进一步探讨。
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