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药理研究
   

灵芝对巨噬细胞吞噬及碳廓清试验的作用
【 整理发布:王力野生灵芝网 】 【 发布日期:7/6/2011 】  浏览次数:2779  

    本文主要观察灵芝对巨噬细胞功能的影响。结果证明灵芝在试管内10~50μg/ml可以刺激巨噬细胞吞噬。高浓度的灵芝冻融部分(100μg/ml)可使吞噬功能抑制。整体研究证明灵芝100~500mg/kg促进巨噬细胞吞噬功能。碳廓清试验证明口服灵芝125~625mg/kg qd.×4可以促进网状内皮系统的功能,加速碳粒的清除。 

关键词  灵芝;吞噬作用;碳廓清试验 

巨噬细胞在免疫系统起重要作用,激活的巨噬细胞是机体对抗外来细菌、病毒、真菌及寄生虫的主要防御机制并已证明巨噬细胞具有抗肿瘤的作用。此外,巨噬细胞可以通过直接作用或间接通过所分泌的各种可溶性因子对免疫系统的启动及调节起关键性作用。 

灵芝在民间被视为是一种珍贵的药物具有延长寿命,缓解各种慢性疾病之效,提示它可能作用于免疫防御机制。鉴于巨噬细胞在此机制中的重要地位,本文主要观察LZ对巨噬细胞吞噬的作用。我们将继续报告LZ对IL-1与肿瘤坏死因子产生的影响。 

材料和方法 

动物 

昆明种小鼠,♂,20~26g,由上海医科大学实验动物部供应。 

试剂 

灵芝的热水浸出液由日本和汉生药研究所提供,取定量灵芝提取物,经研磨后溶于0.2%羧甲基纤维素钠(CMC),80℃水浴振摇4h。混悬液供整体研究之用。进行试管内研究时取少量灵芝提取物,溶于NS于80℃水浴中振摇2h,离心1600rpm×10min,上清液称为灵芝的水溶部分(Part A),放置于4℃待用。灵芝经振摇后,快速置-30℃冻存,然后迅速于37℃溶解,如此反复冻融3次,离心1600rpm×10min,此上清液称为灵芝的冻融部分(Part B)。 

RPMI-1640购自GIBCO,含Hepes 15mmol/L,青霉素100 U/ml,链霉素100μg/ml,小牛血清(NCS)10%,2-巯基乙醇(2-ME)5×10-5mol/L。印度墨汁为Winsaw & Newton产品,墨汁:NS=1∶2。 

试管内研究巨噬细胞吞噬 

小鼠腹腔注射2.5%硫乙醇酸钠1ml致敏,4d后取腹腔细胞,洗2次,计数,调节细胞浓度至3×106/ml,加入内有盖玻片的小玻璃皿内。1ml/皿,37℃ 5% CO2培养1h,弃去非粘附细胞。取新鲜绵羊红细胞(SRBC)洗3次,调节成5% V/V的混悬液。于上述小玻璃皿中加入0.1ml血。同时在这单层培养的巨噬细胞上再加入灵芝1~100μg/ml,每组复皿三个,轻轻振摇玻璃皿,使SRBC及药物均匀分布。37℃再培养2h。取出盖玻片,漂洗,以1∶1的甲醇丙酮溶液固定,按Giemsa染色。 

整体研究巨噬细胞吞噬 

小鼠随机分4组,分别为CMC对照及给灵芝125,250及500mg/kg三组。每只小鼠腹腔注射2.5%硫乙醇酸钠培养基1ml,然后口服药物,qd.×4,在最后一次给药后2h,腹腔注射2% SRBC每鼠1ml。1h后处死,取腹腔细胞,加入内有盖玻片的小玻璃皿中,37℃培养1h,取出盖玻片,漂洗,1∶1甲醇丙酮溶液固定,Giemsa染色。 

碳廓清试验 

小鼠随机分成三组,一组作对照,口服0.2%CMC qd.×4灵芝组口服125,625mg/kg po. qd.×4。最后一次给药后24h,尾静脉注射1∶2印度墨汁0.1ml/10g。注射后,2,15min于眼静脉窦取血30μl,置于含蒸馏水1.5ml的小试管内。实验结束处死小鼠,称肝、脾重量。含血的标本于600nm波长比色。按下列公式计算吞噬指数。 

ω为体重,ωL.S为肝脾重量之和,K为斜率. 

本实验以吞噬指数α估计网状内皮系功能. 

结    果 

 灵芝在试管内对巨噬细胞吞噬的影响 

表4-1表明灵芝的水溶部分,表4-2表明灵芝的冻融部分,在10~50μg/ml均明显促进巨噬细胞吞噬。但灵芝冻融部分的高浓度,即100μg/ml则显示抑制作用(表4-2)。 

             表4-1  灵芝水溶液在试管内对巨噬细胞吞噬功能的影响 

               药物浓度                      吞噬百分率(%)              

组  别        (μg/ml)               Exp.1                 Exp.2 
 
对照组                               22.6±2.8              19.5±2.2 

灵芝组           1                   23.2±3.2              20.0±2.5 

灵芝组           10                  29.4±1.8**            25.9±2.2** 

灵芝组           25                  35.6±4.6**            27.5±1.6** 

灵芝组           50                  37.1±3.6**            30.0±2.4** 

灵芝组          100                  40.5±4.2**            38.3±3.4** 
 
对照组: RPMI-1460 

    X±SD;n=4; **P<0.01 
 

 表4-2  灵芝冻溶液在试管内对巨噬细胞吞噬功能的影响 

               药物浓度                      吞噬百分率(%)              

组  别        (μg/ml)               Exp.1                 Exp.2 
 
对照组                               23.0±3.9              19.4±3.6 

灵芝组           1                   22.5±1.8              19.3±3.7 

灵芝组           10                  29.4±2.6*             27.0±3.0* 

灵芝组           25                  30.6±4.0*             31.1±2.5** 

灵芝组           50                  34.5±4.8**            38.7±2.4** 

灵芝组          100                  20.3±3.8              18.3±2.7 
 
对照组: RPMI-1640 

    X±SD;n=4; *P<0.05, **P<0.01 
 

 灵芝对整体巨噬细胞吞噬功能的影响 

口服灵芝125~500mg/kg qd.×4可以促进小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能,与试管内结果一致(表4-3)。 

              表4-3  灵芝整体给药对巨噬细胞吞噬功能的影响 

     组  别            药物浓度(mg/kg)             吞噬百分率(%) 
 
     对照组                --                         73.2±2.68 

     灵芝组                125                        83.4±3.88** 

     灵芝组                250                        89.1±2.20** 

     灵芝组                500                        93.1±2.38** 
 
     对照组:0.2% CMC 

     X±SD; n=5; **P<0.01 
 

 灵芝对碳廓清试验的影响 

结果证明口服灵芝125,625mg/kg qd.×4能促进网状内皮系功能,使碳粒清除加速(表4-4)。 

                        表4-4  灵芝对碳廓清作用的影响 

   组  别             mg/kg          动物(只)        (α值X±SD) 
 
   对照                                9                 2.11±0.5 

   灵芝                125             8                 2.92±0.4** 

   灵芝                625             8                 2.53±0.9* 
 

对照:0.2% CMC 

X±SD; *P<0.05, **P<0.01 

讨    论 

根据研究,我们设想灵芝为一种免疫调节剂,其对细胞介导的免疫反应,与其剂量及免疫系统的功能状态有关。灵芝尚显示双向调节作用。本结果显示灵芝可明显促进巨噬细胞吞噬以及加强网状内皮系统的功能。已知巨噬细胞是免疫系统中很重要的一部分,不仅与特异性免疫有关,也与机体非特异性防御机制有关,灵芝促进单核-巨噬细胞系统的功能,可能联系到其治疗某些慢性疾病的效果。 

 
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