| 灵芝对淋巴细胞增殖的影响 |
| 【 整理发布：王力野生灵芝网 】 【 发布日期：7/6/2011 】 浏览次数:2236 |
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本文研究在日本培植的灵芝（Ling Zhi, LZ, Ganoderma Lucidum, Fr. Karst）的热水提取物对淋巴细胞增殖的影响。测定灵芝单独及联合Con A或Lps对小鼠脾细胞摄取3H-TdR的作用。灵芝口服300mg/kg qd.×10或在试管内10~500μg/ml对淋巴细胞增殖有直接刺激作用，更高浓度（1000μg/ml）则产生抑制效应。冻融部分较水溶部分的作用为强。灵芝对Con.A诱导的淋巴细胞增殖具有双向调节作用，这主要与灵芝和Con A的浓度有关。一般而言，灵丹妙药芝对于由亚适剂量Con A(0.625μg/ml)引起的淋巴细胞增殖起促进作用；但当细胞受适量Con A（2.5μg/ml）刺激而高度激活时，则起抑制作用，且作用与药物浓度呈依赖关系。
对于由环磷酰胺引起免疫抑制的小鼠，灵芝可使被抑制的淋巴细胞增殖速度加快。但是灵芝在整体及试管内对于由Lps诱导的淋巴细胞增殖并无刺激作用。这说明灵芝对B细胞的作用可能与对T细胞的作用机理不尽相同。
关键词 灵芝；淋巴细胞增殖
灵芝（Ling Zhi, LZ, Ganoderma Lucidum, Fr. Karst）是一种真菌，具有广泛的药理作用，长期以来用作保健药品。迄今有关其对免疫系统的作用研究不多，作用机理更不清楚。本文研究灵芝对小鼠淋巴细胞增殖的作用。
材 料 与 方 法
动物
昆明种小鼠，♂，18~22g，由上海医科大学实验动物部供应。
试剂
灵芝热水提取物呈棕黄色粉末，由日本和汉生药研究所提供。取定量灵芝提取物，经研磨溶于含0.2%羧甲基纤维素钠的生理盐水，置80℃水浴震荡4h，此制剂作整体研究用。如用于试管内研究，则取少量（约10mg）灵芝提取物，溶于生理盐水，在80℃水浴振荡2h，然后离心（1600rpm 10min），取上清液保存于4℃，临用前再适当稀释。此为灵芝的水溶性部分（Part A）。上述灵芝溶液在经水浴振荡后，置-30℃及37℃快速冻融3次，再离心取其上清液，即为灵芝提取物的冻融部分（Part B）。
RPMI-1640培养基，GIBCO产品，含Hepes 15mM,青霉素100 U/ml，链霉素100μg/ml，小牛血清10%，2-巯基乙醇5×10-5mmol。
刀豆蛋白A（Concanavalin A, Con A）,脂多糖（Lipopolysaccaride, Lps)均为Sigma产品。
3H-胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）为中科院原子核研究所产品，比活性为1110 GBq/mmol。
试管内淋巴细胞增殖试验
小鼠以颈椎脱位致死，无菌取脾脏，分离脾细胞，尼龙网过滤，蒸馏水破坏红细胞，调节至等渗，以RPMI-1640培养液洗三次，计数，调节细胞浓度为1×107/ml。于96孔培养板，每孔加入1×106个细胞、不同浓度的灵芝溶液单独或联合Con A和Lps。置37℃ 5%CO2
培养箱48h。培养终止前6h，每孔加入3H-TdR 9.25 KBq，用多头细胞收集仪将细胞收获至醋酸纤维薄膜，β-液闪仪测定3H-TdR的掺入值，以t试验进行统计分析，每个条件复孔三个。
整体研究淋巴细胞增殖试验
小鼠随机分组，对照组口服0.2 CMC 0.5ml qd.×10;治疗组口服灵芝300mg/kg,qd. ×10。按上述方法制备脾细胞，同上法培养后测定。
对免抑制小鼠的作用
小鼠40只，阴机分为4组。对照组口服灵0.2%CMC0.5ml/鼠，qd. ×10;环磷酰胺组腹腔注射10mg/kg qd.×5。灵芝两组分别口服灵芝150、300mg/kg,qd.×10同时腹腔注射环磷酰胺10mg/kg qd.×5。按上法制备脾细胞及测定。
结 果
灵芝在试管内对淋巴细胞增殖的影响
在无致裂原存在条件下，灵芝Part A 1～500μg/ml或Part B 1～10μg/ml单独均可
刺激淋巴细胞摄取3H-TdR。但在更高浓度如Part A 1000μg/ml或Part B 100μg/ml以上则转为抑制作用。由表1-1可以看出Part B的作用比Part A强，在较低浓度即开始转向抑制。
表1-1 灵芝对试管内淋巴细胞增殖的作用
药物浓度 cpm/1×106细胞
（μg/ml） Part A Part B
0 2991±445 2991±445
1 3744±529 11208±554**
10 5997±699** 10532±1301**
100 8054±1013** 1595±18*
500 7668±1181** 1552±264*
1000 1126±156** 499±48**
Part A:水溶部分；PartB：冻融部分。X±SD；n=3；*P<0.05；**P<0.01
灵芝对于由Con A诱导的淋巴细胞增殖的影响与Con A的浓度密切相关，灵芝无论是Part A与Part B在1～500μg/ml均促进由低浓度Con A（0.625μg/ml）诱导的淋巴细胞增殖，作用与药物浓度呈依赖关系。灵芝于更高浓度（>500μg/ml）时则转向抑制效应。
当淋巴细胞受适量Con A（1.25μg/ml）刺激时,灵芝作用介于上述两者之间。其规律与低浓度Con A组相似，即低浓度灵芝呈刺激作用，而高浓度呈抑制作用（表1-2）。
表1-2 灵芝对Con A诱导的试管内淋巴细胞增殖的作用
药物浓度 cpm/1×106细胞
（μg/ml） Con A 0.65μg/ml Con A 1.25μg/ml Con A 2.5μg/ml
Part A 0 3589±44 19559±3087 69991±1894
1 5886±3020 35293±9642 58956±12175
10 13366±5995* 19954±8656 38487±2523*
100 19788±4285** 16944±6768 28640±10150**
500 9375±1677* 4948±2044** 15496±1254**
1000 984±117** 764±166** 4732±832**
Part B 1 16546±3217** 20509±4701 26034±7193**
10 15944±4801* 61059±5666** 35337±13165*
100 7407±585** 56432±7227** 17476±281**
500 4196±460** 4512±470** 16996±4123**
1000 685±28** 1918±98** 7347±825**
Part A:水溶部分；PartB：冻融部分。X±SD；n=3；*P<0.05；**P<0.01
灵芝在试管内对于由5或10μg/ml Lps引起的淋巴细胞增殖主要呈现抑制作用。已知Lps为B细胞刺激剂，而Con A为T细胞刺激剂，由此可见灵芝对T与B细胞的作用不同（表1-3)。
表1-3 灵芝对Lps诱导的试管内淋巴细胞增殖的作用
药物浓度 cpm/1×106细胞
（μg/ml） Lps 5μg/ml Lps 10μg/ml
Part A 0 37420±2780 63123±6025
1 27369±665** 34113±820**
10 25348±1950** 33771±6324*
100 25901±2187** 30656±4311**
500 22080±675** 24727±3412**
1000 3942±733** 11528±2865**
Part B 1 30051±3862 37491±8736*
10 35341±5173 44201±1813**
100 34057±4299 30985±6037**
500 20221±3601** 26271±1357**
1000 7288±778** 8983±1413**
Part A:水溶部分；PartB：冻融部分。X±SD；n=3；*P<0.05；**P<0.01
二、灵芝对小鼠整体淋巴细胞增殖的影响
研究证明口服灵芝300mg/kg qd.×10的小鼠即使在无致裂原存在条件下淋巴细胞增生也比对照组为快.灵芝明显刺激由Con A 0.625～1.25μg/ml诱导的淋巴细胞增殖。但在同一条件下对于由Lps 5或10μg/ml诱导的作用，灵芝却呈现抑制效应（表1-4）。
表1-4 灵芝对整体淋巴细胞增殖的影响
cpm/1×106 细胞
致裂原 μg/ml 0.2% CMC 300 mg/kg灵芝
-- -- 1338±94 2676±621**
Con A 0.625 4254±802 10168±1876**
1.25 21471±1563 42946±1001**
2.50 33685±1727 42031±9645
Lps 5 5427±996 420±186**
10 5963±30 339±4**
口服灵芝,qd.×10;X±SD; **P<0.01
三、灵芝对免疫抑制小鼠的作用
表1-5表明，环磷酰胺组在服药后最初5天内体重明显低于对照组，以后又逐渐增加。但如联合服用灵芝则在最初5天未见体重明显下降。另外，环磷酰胺可使胸腺明显缩小，重量减轻。灵芝使胸腺重量增加，300mg/kg剂量组与环磷酰胺组之前有明显统计学差别（P<0.01）。
表1-5 灵芝和环磷酰胺对小鼠体重、胸腺和脾脏重量的影响
药 物 剂量 体重（g） 胸腺 脾脏
（mg/kg） d0 d5 d10 （mg） （mg）
0.2% CMC -- 24.0±1.5 28.0±1.6 29.7±1.9 79.1±25.2 89.5±18.2
环磷酰胺 10 24.2±1.8 23.3±2.1*** 28.8±2.0 40.8±17.4*** 113.7±43.9
环磷酰胺 10 24.5±1.8 28.0±2.1 29.8±1.6 54.8±23.2* 113.2±19.0**
+灵芝 150
环磷酰胺 10 24.7±1.4 29.8±1.3* 30.7±1.0 66.3±18.4△△ 125.6±30.2***
+灵芝 300
各组的的脾细胞进行淋巴细胞增殖的研究，结果证明不论有无Con A或Lps存在，环磷酰胺（CYA）明显抑制淋巴细胞增殖。但是灵芝联合CYA组，淋巴细胞增殖明显高于CYA组。与CYA单独应用组比较，150～300mg/kg灵芝显著增加3H-TdR掺入（P<0.01）（表1-6）。
表1-6 灵芝与环磷酰胺联合用药对整体淋巴细胞增殖的影响
cpm/1×106细胞
致分裂剂 μg/ml 0.2% CMC CYA CYA+150mg/kg灵芝 CYA+300mg/kg灵芝
-- 4598±620 1992±342** 1527±190 1533±217
Con A 0.625 61403±10172 1475±159 7126±795 2684±58
1.25 83372±12369 1169±337 16231±5368 6655±2250*
2.5 84917±23495 3565±435 56274±12847 6559±1915
Lps 5 14003±3094 87±12** 4142±214** 763±43**
10 16845±2175 99±24** 3098±612** 460±27**
**
讨 论
无论试管内或整体研究均证明适量的灵芝可以直接刺激淋巴细胞增殖,高浓度则产生抑制。灵芝对T细胞的增殖作用决定于两个主要的因素，一是细胞的状态，另一是所用灵芝的浓度。静止的T细胞，或为亚适剂量Con A轻度激活的细胞，灵芝可以增强Con A的作用而促进淋巴细胞增殖。但是如果T细胞受适量Con A刺激而高度激活时则灵芝抑制淋巴细胞增殖。Lps是一致裂原，主要刺激B细胞，对正常小鼠所整体研究以及试管内研究均证明由Lps诱导的淋巴细胞增殖，灵芝主要呈现抑制效应。已知环磷酰胺是一种免疫抑制剂，能抑制体液或细胞介导的免疫功能，抑制由Con A 或Lps诱导的淋巴细胞增殖。灵芝则能对抗环磷酰胺的免疫抑制作用而促进淋巴细胞增殖。
根据上述实验研究结果，提示灵芝具有免疫调节作用，也许对于免疫功能受抑制的病人会有帮助，但应考虑所用剂量。 |
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